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        伯樂熒光定量pcr儀實際操作時都需要注意什么?

        發布時間:2021-03-05   點擊次數:100次
           伯樂熒光定量pcr儀,由熒光定量系統和計算機組成,用來監測循環過程的熒光。與實時設備相連的計算機收集熒光數據。數據通過開發的實時分析軟件以圖表的形式顯示。原始數據被繪制成熒光強度相對于循環數的圖表。原始數據收集后可以開始分析。實時設備的軟件能使收集到的數據進行正?;幚韥韽浹a背景熒光的差異。正?;罂梢栽O定域值水平,這就是分析熒光數據的水平。
          伯樂熒光定量pcr儀實驗操作注意事項:
          盡管擴增序列的殘留污染大部分是假陽性反應的原因,樣品間的交叉污染也是原因之一。因此,不僅要在進行擴增反應是謹慎認真,在樣品的收集、抽提和擴增的所有環節都應該注意:
          1.戴一次性手套,若不小心濺上反應液,立即更換手套;
          2.使用一次性吸頭,嚴禁與PCR產物分析室的吸頭混用,吸頭不要長時間暴露于空氣中,避免氣溶膠的污染;
          3.避免反應液飛濺,打開反應管時為避免此種情況,開蓋前稍離心收集液體于管底。若不小心濺到手套或桌面上,應立刻更換手套并用稀酸擦拭桌面;
          4.操作多份樣品時,制備反應混合液,先將dNTP、緩沖液、引物和酶混合好,然后分裝,這樣即可以減少操作,避免污染,又可以增加反應的準確度;
          5.后加入反應模板,加入后蓋緊反應管;
          6.伯樂熒光定量pcr儀操作時設立陰陽性對照和空白對照,即可驗證PCR反應的可靠性,又可以協助判斷擴增系統的可信性;
          7.盡可能用可替換或可高壓處理的加樣器,由于加樣器容易受產物氣溶膠或標本DNA的污染,使用可替換或高壓處理的加樣器。
          如沒有這種特殊的加樣器,至少PCR操作過程中加樣器,不能交叉使用,尤其是PCR產物分析所用加樣器不能拿到其它兩個區;
          8.重復實驗,驗證結果,慎下結論。
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