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        T100 PCR儀的操作須滿足基本要素和反應過程的要求

        發布時間:2020-10-26   點擊次數:109次
           簡單的說,T100 PCR儀就是利用DNA聚合酶對特定基因做體外或試管內InVitro的大量合成,基本上它是利用DNA聚合酶進行專一性的連鎖復制。目前常用的技術,可以將一段基因復制為原來的一百億至一千億倍。
          基本要素:
          基本的PCR須具備
          1.要被復制的DNA模板Template
          2.界定復制范圍兩端的引物Primers.
          3.DNA聚合酶Taq.Polymearse
          4.合成的原料(四種脫氧核苷酸)及水。
          T100 PCR儀反應過程有以下3個步驟:
          1、變性
          將反應體系混合物加熱到94℃,維持較短時間(大約15s-30s),使目標DNA雙螺旋的氫鍵斷裂,形成單鏈DNA作為反應模板。
          2、退火
          將反應體系冷卻至特定的溫度(引物的TM值左右或以下),引物與DNA模板的互補區結合,形成模板引物復合物。
          3、延伸
          將反應體系的溫度提高到72℃并維持一段時間,引物在耐熱聚合酶的作用下,以引物為固定起點,以4種單核苷酸(dNTP)作為底物合成新的DNA鏈。
          以上三步作為T100 PCR儀一個循環重復的進行,每一循環的產物作為下一循環的模板。如此循環數十次,從而使目的基因得到指數級擴增,達到檢測或獲取基因的目的。
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