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        電穿孔系統的應用主要有以下幾方面

        發布時間:2021-02-04   點擊次數:53次
           電穿孔系統是一種特殊設備。通常將細胞放在電擊杯中,電擊杯的兩邊有電極,這樣插入到儀器中后會與之有電流通路。將細菌細胞與DNA混合后上樣到電擊杯中,并在幾微秒時間內施加1000伏到10000伏的電場。這樣會在膜兩邊造成0.5到1伏的電壓,據信這會使得細胞膜的磷脂雙層重新排列,從而形成小孔。處于這個狀態時,質粒DNA就能穿過膜。電脈沖停止后,膜將自身得到恢復。細菌攝入質粒后,就可在含抗生素的瓊脂糖培養板上生長。
          電穿孔系統轉化的一個替代方法是熱激法轉化,它需要用到氯化鈣和熱激來處理細菌,從而將DNA導入細胞內。通常,熱激法要比電穿孔法更溫和并且不需要低鹽濃度。連接反應,就是將您的目的基因插入到質粒后形成的產物,可以被直接用來做熱激轉化。熱激法比電穿孔法便宜,無需使用昂貴的設備或電擊杯。但另一方面,熱激法的轉化效率要比電穿孔法低,并且耗時長。而且它僅局限于細菌,酵母和植物原生質體,而電穿孔法還可用于哺乳動物細胞。
          這里您看到的是將小鼠的胚胎成纖維細胞放置在電擊杯中。當電穿孔完成后,轉化效率可通過觀察細胞合成一種質粒編碼的綠色熒光蛋白的表達程度來判斷。轉染這個術語是指對哺乳動物細胞的轉化,它通常要比細菌細胞所需的電場強度低,并有更高的時間常數。
          電穿孔系統還可用于整個動物,如您在這里看到的發育中的雞胚胎。將質粒DNA注射到雞的腦部,然后使用一個電穿孔探頭在腦組織中施加電場。1到2天后,神經元將合成的質粒編碼的綠色和紅色熒光蛋白,科研人員可觀察發育中雞的腦組織的結構變化?!?/div>
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